|
|
Stanovení Staphylococcus aureus a Bacillus cereus v cukrářských výrobcích
Vdolečková, Monika ; Necidová,, Lenka (oponent) ; Šárka,, Bursová (vedoucí práce)
Tato bakalářská práce se v teoretické části zaměřuje na popis bakterií Bacillus cereus a Staphylococcus aureus, jakožto bakterií, které mohou kontaminovat suroviny ať už rostlinného či živočišného původu. Obě tyto bakterie se mohou vyskytovat v půdě, ve vodě, ale můžeme se s nimi i setkat na naší pokožce. Tato skutečnost může napomáhat kontaminaci při výrobě cukrářských výrobků. V experimentální části byly zpracovány odebrané vzorky vánočního cukroví. U vánočního cukroví byla sledována přítomnost výše zmíněných bakterií a u vzorků, kde byla přítomnost bakterií prokázána, byly dále detekovány geny kódující produkci toxinů. Ze stanovených výsledků vyplývá, že vánoční cukroví z tržní sítě i domácí výroby není hlavním zdrojem S. aureus, ale jsou možným zdrojem toxigenních kmenů bakterie B. cereus.
|
|
|
Foodborne Staphylococcus Aureus: Identification and Enterotoxin Production in Milk and Cheese.
Hrušková, Vendula ; Španová, Alena (oponent) ; Kmet,, Vladimír (oponent) ; Kaclíková, Eva (vedoucí práce)
Foodborne diseases caused by bacteria are an actual issue worldwide. To produce food, which is safe for human consumption, data about food-borne pathogen virulence is required to complement the already existing knowledge about the bacterial growth and survival in food. There is also a growing need for rapid and sensitive methods to detect these pathogens. In this dissertation, the real-time PCR-based method for the detection of S. aureus in food using selective enrichment and the impact of environmental factors on S. aureus growth and enterotoxin production in milk and cheese are described. We developed a rapid and sensitive method for the detection of S. aureus in food using selective enrichment and a new species-specific real-time PCR. The method facilitated the detection of S. aureus on the next day after the sample reception. This method can be used for S. aureus detection as a faster, highly specific, and more sensitive alternative to the microbiological method. We investigated the effect of three different temperatures, 8°C, 12°C and 20°C on S. aureus growth and SED production in pasteurized milk and on growth, sed gene expression and SED production in Brain heart infusion. The experiments were performed in small-scale fermentors for six days and gene expression was followed by qRT-PCR. SED production was measured using Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay (ELISA). In BHI the growth pattern was the same at 20°C and 12°C but delayed in the latter. At 8°C there was no growth. In milk, growth was lower compared to BHI. sed mRNA was detected at 20°C and 12°C after 4 and 7 hours respectively in BHI and the production occurred during the exponential phase of growth. In milk the SED production at 20°C and 12°C occurred earlier in growth but a lower total amount was produced compared to BHI. At 8°C, there was no SED production like in BHI. The combined effect of low temperature, 12°C, and the presence of competing background microflora derived from raw milk on the growth of S. aureus and SED production in pasteurized milk was further investigated. An inhibitory effect on S. aureus growth and enterotoxin production was observed and the impact of competition was greater than the impact of low temperature. The enterotoxin production was low and correlated with the growth. By lowering the amount of competing microflora and increasing the inoculation level of S. aureus, only a slight increase in enterotoxin production occurred. In the next stage, two different cheese matrices were inoculated with S. aureus to simulate a post-contamination scenario in cheese manufacture. Samples were collected over period of 4 weeks. Critical food factors, like competing microflora and pH, which are responsible for down- and up-regulation of the virulence of S. aureus, were monitored. We tried to indentify if there are situations in which: (i) no growth but enterotoxin formation is observed, and (ii) growth and no enterotoxin formation occurs.
|
|
|
Vliv antibakteriálních nanomateriálů na vznik bakteriální rezistence
Bábíková, Daniela ; Lucie,, Bozděchová (oponent) ; Šmerková, Kristýna (vedoucí práce)
Bakteriální rezistence vůči antibiotikům je již dlouhá léta diskutovaným problémem. Antibiotika jsou používána v zemědělské prvovýrobě, konkrétně v chovu prasat. Vysoká koncentrace zinku se však dostává do půdního prostředí ve formě vedlejších zemědělských produktů. Dávky zinku působí na střevní bakterie prasat, ale i na mikroorganismy v prostředí a mohou vést ke vzniku rezistence vůči kovům, ale právě i vůči antibiotikům. Předložená práce se zabývá vlivem ZnO a nově používaných nanočástic (ZnO NPs) na baterie S. aureus, methicilin-rezistentní S. aureus a E. coli. Získaná data této práce poukazují na vliv ZnO ve zvyšování minimální inhibiční koncentrace antibiotik a také na vznik rezistence u E. coli. Na základě biochemických testů byl také potvrzen efekt na změnu metabolických drah bakterií reagující s vybranými substráty. Opakovaná subkultivace bakterií s testovanými ZnO a ZnO NPs má zásadní dopad na citlivost bakterií k antibiotikům a mění i biochemické dráhy. Studie zabývající se problematikou dlouhodobého vlivu ošetřujících látek jsou zásadní pro vývoj moderních antibakteriálních složek.
|
|
|
Využití různých typů povrchově modifikovaných magnetických nanočástic pro izolaci a purifikaci bakteriální DNA/RNA
Bednářová, Eliška
V předložené závěrečné práci „Využití různých typů povrchově modifikovaných magnetických nanočástic pro izolaci a purifikaci bakteriální DNA/RNA“ byly využity magnetické částice, které byly povrchově modifikovány tetraethoxysilanem (TEOS) a (3-aminopropyl)triethoxysilanem (APTES). Cílem bylo optimalizovat protokol izolace nukleových kyselin pomocí magnetických částic z gram negativních i gram pozitivních bakterií, aby se dosáhlo co nejvyšší výtěžnosti RNA. V teoretické části práce byla shrnuta struktura a složení bakteriálních buněk, především složení buněčné stěny, díky které se bakterie rozdělují na gram pozitivní a gram negativní. Dále byly uvedeny jednotlivé možnosti detekce bakterií, které se využívají v klinické praxi. Při detekci bakterií pomocí molekulárních metod je často zásadním krokem izolace nukleových kyselin. Jednou z metod izolace je izolace pomocí magnetických částic, u které byl vysvětlen princip. U magnetických částic bylo popsáno složení a využívané funkcionalizace částic pro izolace nukleových kyselin. V praktické části práce byly magnetické částice nejprve charakterizovány několika metodami z důvodu specifikace jejich vlastností. Mohly tak být vybrány nejvhodnější částice pro izolace nukleových kyselin. Dále byly částice použity na optimalizace protokolu izolace nukleových kyselin z buněčného lyzátu, kdy se nejvíce osvědčil lyzační pufr s 30% detergentem Triton X-100, který měl podobné výsledky jako 30% detergent EcoSurf. Následovně byla hledána metoda efektivní lýzy bakteriálních buněk. Bylo využito několik metod, nejlepších výsledků dosáhla mechanická homogenizace zirkonovými kuličkami o velikosti 0,1 mm v kombinaci s lyzačním pufrem s 1% detergentem EcoSurf. Výtěžnost RNA z izolací pomocí magnetických částic byla porovnána s izolací pomocí kolonkové metody, přičemž byl na izolace použit komerční izolační kit. Pomocí kolonkové metody bylo dosaženo výtěžnosti RNA u S. aureus přibližně 350 ng/µl, při použití magnetických částic tomu bylo o 70 ng/µl méně. Výtěžnost RNA za pomoci komerčních pufrů byla značně vyšší než při použití vlastních pufrů, proto by bylo vhodné dále optimalizovat protokol izolace a složení vlastních pufrů při izolaci nukleových kyselin. Magnetické částice s modifikací TEOS i APTES mají velký potenciál pro využití při izolacích nukleových kyselin z bakterií.
|
|
|
Hodnocení mikrobiologických rizik jedlého hmyzu
Hedvičáková, Adéla
Konzumace jedlého hmyzu je činnost, která v poslední době nabývá na významu. Pro bezpečné využití jedlého hmyzu je nutné mimo jiné provést hodnocení rizik spojených s konzumací. Tato práce byla zaměřena na hodnocení mikrobiologických rizik jedlého hmyzu. Teoretické část práce podává informace o nutričních vlastnostech jedlého hmyzu a rizicích spojených s konzumací hmyzu. Dále zmiňuje legislativu, které souvisí se zařazováním hmyzu do potravin. Práce popisuje vliv hmyzu a jeho konzumaci na životní prostředí a předkládá faktory, na které je nutné se do budoucna dále zaměřit. Práce podává výčet významných patogenních mikroorganismů. V praktické části je možné nalézt statistické vyhodnocení naměřených hodnot obsahu patogenů, které byly přítomny u hmyzu a v krmivech. Byly stanoveny celkové počty mikroroganismů, Escherichia coli, enterobakterie, plísně, Staphylococcus aureus a bakterie mléčného kvašení. Výsledky byly porovnány s výsledky studií na podobné téma.
|
|
|
Staphylococcus aureus - jeho výskyt a možnosti detekce v mléce a mléčných výrobcích
Fenclová, Denisa
Teoretická část práce je zaměřena na shrnutí dosavadních poznatků o S. aureus, jeho patogenezi a výskyt a možnosti jeho detekce v mléce a mléčných výrobcích. Experimentální část práce je zaměřena na stanovení S. aureus využitím různých kultivačních metod. S. aureus byl stanovován pomocí B-P agaru s přídavkem RPF, ClearMilku testu, MicroFastu® a PetrifilmuTM. Stanovení bylo vyhodnoceno následovně: B-P agar s přídavkem RPF > Petrifilm > MicroFast® > ClearMilk test. Další část experimentální práce se věnuje možnosti detekce S. aureus pomocí nově vyvíjeného detekčního biosenozorického systému.
|
|
|
The effect of salts on the hydrolytic stability of biopolymer carriers with antibacterial substances
Tertinská, Martina ; Brtníková, Jana (oponent) ; Vojtová, Lucy (vedoucí práce)
This diploma thesis deals with observing the effects of salt on the stability of biopolymer carriers made of protein and polysaccharide. The theoretical part is concerned with biomaterials and materials for sample preparation and also deals with the current situation of treatment of infected wounds with various materials. Within the experimental part, the carriers were prepared in two different buffers with different concentrations of sodium chloride in order to stabilize bioactive proteins, peptides or enzymes generally used for carrier entrapment. In every series of samples there were prepared both crosslinked and non-crosslinked samples. Properties like hydrolytic stability and swelling ratio were tested and the effect of salt concentration on sample stability was observed. Since the optimal salt concentration has been established, antibacterial enzyme was entrapped into all carriers and its release was monitored. Whereas at non-crosslinked samples significant differences between salt and salt-free samples both stability and enzyme release have been monitored, at crosslinked samples the differences were neglectable. However, in all cases the enzyme released from foamed samples according to first order kinetics, which is concentration dependent. Based on the results from disk diffusion test provided on different strains of S. aureus, the concentration of 325 mg/ml, have been chosen for my further work. Prepared carriers with antibacterial enzyme could be used as both- fast or prolonged releasing wound dressings for Staphylococcus aureus or methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) infected tissue.
|
|
|
Globální epidemiologie Staphylococcus aureus vyskytujících se ve zdravotnických zařízeních a v komunitě
Mrázková, Pavlína ; Tkadlec, Jan (vedoucí práce) ; Balíková Novotná, Gabriela (oponent)
Staphylococcus aureus je důležitým lidským patogenem, který je zodpovědný za široké spektrum infekcí vyskytujících se mezi pacienty ve zdravotnickém prostředí a v komunitě. Velká pozornost je věnována kmenům rezistentních na methicilin (MRSA), avšak i kmeny na methicilin citlivé (MSSA) zůstávají hlavní příčinou infekcí. Epidemiologie S. aureus, zejména kmenů MRSA, vykazovala v posledních letech rychlý vývoj, je charakteristická výskytem epidemických linií, které dominují v určitých geografických oblastech. Techniky molekulární typizace umožnily identifikovat hlavní úspěšné linie MRSA a MSSA, díky čemuž je možné pozorovat jejich rozšíření a zároveň reportovat prevalenci sledovaných klonů na daném území. Pro pochopení evoluce a šíření S. aureus, stejně jako pro nasazení efektivních preventivních opatření proti šíření tohoto nebezpečného patogenu, je znalost epidemiologie kmenů S. aureus naprosto nezbytná. V rámci bakalářské práce bude nejprve představen recentní přehled metod využívaných pro klonální analýzu Staphylococcus aureus. Dále bude provedena rešerše literatury s cílem vytvořit přehled o dominantních liniích S. aureus a MRSA cirkulujících v nemocnicích a komunitě s důrazem na situaci v České republice a v Evropě. Klíčová slova: Staphylococcus aureus, MSSA, epidemiologie, MRSA, klonální...
|
|
|
Vliv systému Quorum sensing Staphylococcus aureus na toleranci k antibiotikům
Šaňková, Michaela ; Lichá, Irena (vedoucí práce) ; Buriánková, Karolina (oponent)
Staphylococcus aureus je grampozitivní oportunně patogenní bakterie, která především u oslabených jedinců způsobuje řadu chronických infekcí. Největší problém v klinické praxi představují v poslední době hlavně infekce způsobené takzvanými perzistery. Jedná se totiž o subpopulaci buněk, které díky adaptacím na stresové podmínky dokáží odolat i běžně letálním dávkám antibiotik a následně opět vyvolat infekci. Hlavní roli v přepínání mezi aktivní virulentní formou a perzistentním stavem spojeným s tvorbou biofilmu hraje Agr systém, který je zodpovědný za mechanismus quorum-sensing. A právě v tomto systému dochází při chronických infekcích ke hromadění adaptačních mutací, jež ovlivňují schopnost perzistovat. Pro vypracování diplomové práce byly použity klinické izoláty odebírané od pacientů s cystickou fibrózou chronologicky během prvních tří let života. Hlavním cílem práce bylo potvrdit vliv adaptačních mutací na perzistenční schopnosti klinických izolátů a dále také sledovat, jak se v závislosti na působení vybraných antibiotik mění membránový potenciál a metabolická aktivita buněk. Dalším cílem pak bylo vytvořit deleci v genu pro regulátor odpovědi AgrA za použití systému CRISPR/Cas9. Pro charakterizaci perzistenčních schopností byly použity tzv. TD testy (Tolerance Disk Tests) a metoda stanovení...
|
|
| |
host ::
RSS.